高效液相色谱(HPLC)和超高效液相色谱(UHLPC)是两种最流行的液相色谱技术。高效液相色谱和UHPLC有一个填充在色谱柱中的固定相,液体流动相通过色谱柱。感兴趣的组分根据极性进行分离,选择的色谱柱和流动相取决于用于分析的色谱方法。
根据填料和颗粒技术,HPLC和UHLPC色谱柱可分为不同的类别。根据要分离分析的内容,每个列类别都有几个优点和缺点。
全孔色谱柱
多孔球形二氧化硅颗粒广泛用于高效液相色谱和UHPLC。多孔颗粒像海绵一样工作,当它们与固定相相互作用并导致分离时,样品扩散进出孔隙。
使用全多孔色谱柱的优点和缺点是:
优势
提供多种固定相。
高机械强度
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适用于较高的pH值
劣势
二氧化硅在pH 7.5以上的溶解度
pH值小于1.5时键的水解
残留的硅烷醇活性将导致峰拖尾。
多孔色谱柱的一些缺点可以通过改性来克服。硅氧烷桥可以被硅氧烷桥如乙烷键取代,以延长色谱柱在较高pH值下的使用寿命。
核壳柱
核壳色谱柱包含核壳颗粒,也称为表面多孔颗粒。色谱柱具有内部固体二氧化硅不可渗透的核心,该核心被形成外壳的外部二氧化硅多孔层包围。多孔颗粒和核壳颗粒之间的一个很大的区别是扩散仅发生在颗粒的多孔外层,而不是整个颗粒。
使用核壳色谱柱的优点和缺点是:
优点
柱长,柱效更高。
快速分析时间
与全多孔颗粒相比,灵敏度更高。
劣势
方法转移可能很耗时。
需要能在高压下工作的特殊仪器。
整体柱
最后一种色谱柱是整体柱。整体式色谱柱由单个多孔硅胶或有机聚合物制成,而不是许多小硅胶颗粒。单棒具有明确的中孔和大孔结构。大孔类似于颗粒填充柱的间隙体积。大孔决定了柱子的渗透性。整体柱的中孔位于二氧化硅颗粒的表面或二氧化硅骨架中。
使用整体柱的优点和缺点是:
优势
高孔隙率导致低压
只需要少量的样品制备。
微孔结构可以直接注射。
适用于脏样品。
不会因为换床而不稳定。
劣势
可用的固定相不多
不如全多孔色谱柱有效。
存在已知的再现性问题。