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高效液相色谱仪的工作原理

发布时间:2021-06-23

      高效液相色谱仪是一种强大技术分析仪器,能够提供更快的运行、更高的分离度以及更高的通量,满足更多实验室各种不同应用的需求。高效液相色谱仪系统能够在运行和数据管理提供了完整的解决方案。

组件
高效液相色谱柱
这也称为固定相。这是高效液相色谱机器的核心,由多种物质通常二氧化硅中的一种制成,二氧化硅和过量碳反应,碳链是非极性的,因此碳链越长,色谱柱的非极性越大。含有 18 个碳链的色谱柱是常用的,称为 C18 色谱柱。


高效液相色谱样品
样品类型因领域和相关化合物的类型而有很大差异。高效液相色谱可用于分析生物样本(尿液、血液、唾液和肌肉)、环境样本、药物化学(药物)和微生物学(真菌和细菌产生的毒素)中的化合物。


进样
将样品注入高效液相色谱柱。这曾经是手动执行的,经过升级改造后大多数仪器都能实现自动进样,这样更高效便捷,减少了手动输入并允许更高的检测量。


流动相
这实际上只是水和有机溶剂的混合物。流动相之所以得名,是因为它移动通过色谱柱,同时从色谱柱中洗脱化合物,化合物通常沿浓度梯度洗脱,非极性溶剂的百分比同时增加,流动相逐渐变得更加非极性。


高效液相色谱运行
高效液相色谱可以以多种模式进行。最常用的方法称为反相,在这种模式下,化合物从极性最强的化合物开始,到非极性化合物结束。对于正相模式,高功率泵将样品和流动相移动通过色谱柱,运行可能需要 10-60 分钟。


高效液相色谱图 
高效液相色谱图显示了化合物从化学反应中的分离,色谱图是在 254 nm 处查看的。两个主峰出现在 8.20 和 9 分钟,代表具有这些保留时间的两种化合物。吸光度单位 (AU) 的数量显示在 Y 轴上,而运行时间显示在 X 轴上。


应用
在生物学和医学领域,高效液相色谱通常用作分析生物和环境样品是否存在已知化合物(例如代谢物、药物、毒素、杀虫剂)的分析工具,并可帮助识别未知化合物。然而,在化学领域,高效液相色谱通常用于监测化学反应以及确定产品的纯度。

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