液相色谱法是一种成熟的分离技术，广泛应用于表征混合物的各种成分。例如，它可用于研究生物反应、在医学中识别疾病或治疗反应的潜在生物标志物、用于环境分析以监测污染物的存在，或用于药物开发和生产以识别活性药物成分或筛选杂质。对液相色谱不断增长的需求推动了该技术的不断改进和增强，以提供更好、更快的分离。随着需要以更高的精度完全分离越来越复杂的化合物，超高效液相色谱仪已成为众多学科的标准做法。

超高效液相色谱

传统的液相色谱是一项突破，它使混合物能够分离成不同的部分。这些是通过让稀释的样品在重力作用下通过填充柱来收集的。它主要用作纯化技术，因为该过程不易重现。

该过程通过在高效液相色谱仪中使用自动高压（约 6,000 psi）泵得到增强。随着技术的进步，随后可以通过将可施加到 15,000 psi (UHPLC) 以上的压力来实现更复杂的分离。这部分是通过将色谱柱粒径减小到仅 3 微米来实现的。此外，UHPLC 中的流通池通常也更小（<1μL，而 HPLC 沙巴滚球官网入口 10 μL），这减少了分散以保持窄的精确峰。因此，UHPLC 可为复杂混合物提供高性能、高速和高分辨率的分离。


UV 检测通常用于跟踪洗脱液的目标成分，因为它具有高度精确性 (RSD <0.2%)，可以灵敏检测低至 0.05% 的痕量杂质。然而，要通过 UV 检测实现准确定量，物理分离所有杂质非常重要。梯度方法总是用于提高包括不同极性组分的混合物的分离能力，但完全分离需要针对特定​​混合物优化每个操作参数，例如色谱柱类型、流动相，这是通过具有挑战性和时间的方法来实现的。消耗方法开发过程。

多维超高效液相色谱仪

最近，多维高效液相色谱仪分离已被用于实现高度复杂样品的完全分离，而无需进行复杂的方法开发。多维分离极大地提高了峰容量并能够更快地获得结果。除了提高性能外，与单维高效液相色谱仪相比，多维分离还有其他一些优势。其中包括与目标化合物共流出的杂质的分离、无紫外发色团的杂质的鉴定以及质谱法的使用，后者与用于提高色谱性能的磷酸盐缓冲液不兼容。


可以在第二维中重新分析整个样本或仅感兴趣的一小部分（Zhang 等，2013a 和 2013b）。许多不同的技术可以串联使用以获得样品的全面轮廓，例如，可以在二维中使用带电气溶胶检测器检测非紫外吸收发色团，并在三维中使用质谱进行表征（Li等，2014）。