残留物被认为是存在一个小的分析物峰，在进样后注入空白时会出现，这个峰会产生一个相同分析物的大峰。当这种情况发生时，可能会在随后的色谱图中观察到以前分析过的样品的峰，这些峰可能会与所需的分析物同向流动或发生干扰。如下所示，空白质谱揭示了目标分析物的轮廓。这是高效液相色谱中最令人沮丧的问题之一。


　　1.分类结转。

　　经典还是不变。


　　经典残留物观察到的结果是，当空白连续注射时，残留峰的大小有规律地减小。例如，第一个空白峰可能是原始大小的1%，然后下一个空白峰又下降了100倍。这种承载通常是由流路中的机械区域引起的(例如，阀头中的两个表面，管道插入其中，螺母被型锻)。在空白进样期间，一些样品的保留会逐渐稀释，导致每次空白运行期间的残留量逐渐减少。


　　连续结转-不是真正的结转。所有样品和空白总是有一个小峰值，不会随着每次空白运行而减少。这是一些污染源造成的。如果污染物峰值似乎随着空白进样量的增加和减少而增加或减少，则空白很可能被污染。如果不是，污染源在系统的其他地方。


　　第三，考虑“空注”操作的重要性。岛津自动进样器提供独特的空采样能力，无需采样或旋转自动进样器的采样阀或高压阀即可开始色谱操作。这个简单的测试可以帮助确定问题的根源是否是注射事件本身。不产生不符合要求的峰的空运行必须表明自动进样器进样事件是问题的根源。它不能证明自动进样器中残留物的来源，但它确实将问题缩小到了高压阀(人乳头瘤病毒)、其接头和连接色谱柱的出口管。由于岛津自动取样器采用针流道设计，


　　2.更换空白并改变注射量。

　　一件重要的事情是排除空白本身是否可能被污染。检查的一个简单方法是使用不同的基质来源来制备新的空白(即溶剂本身可能被污染)。此外，改变进样量也有帮助——如果空白的进样量增加，残留峰的峰面积也增加，则强烈表明空白被污染。如果您注意到残余峰的大小保持不变，则残余物很可能位于针头外部(请参考外部自动进样器冲洗说明)。如果您注意到残余峰的大小随着每次后续注射而减小，则残余物很可能位于针和/或样品环内(请参考冲洗内部自动进样器的说明)。


　　3.不包括色谱柱。

　　色谱柱可能是残留物的来源，尤其是当随着时间推移出现结垢时。重复注射含有耐火材料或强保留成分的样品，每次注射都会慢慢改变色谱柱粘结相的特性。梯度条件可能无法有效清洁此类材料的色谱柱，随着时间的推移，问题可能会恶化。问题列的一个简单测试是将其从系统中移除，并用零死体积替换。正常运行样品，注意没有色谱柱保留和区分样品成分。跟着它跑一两次。结转是否继续？如果是，问题就和硬件有关。如果没有，问题出在柱子上，你应该换掉它。另一个实验可以显示柱子是否产生残留物。创建一个方法，使泵通过双梯度，如下图所示。从注射开始。该程序从低强度洗脱液条件转移到高强度洗脱液条件，以高强度冲洗色谱柱，然后返回初始条件几分钟。然后重复相同的梯度，但不会发生新的注射。以这种方式，柱床通过溶剂强度梯度，以观察残余峰是否再次产生。如果是，这可能表明填充床或入口筛板是交叉污染的来源，这可能需要更主动和更频繁的柱冲洗。


　　4.检查流路接头。

　　程序通常仅限于人乳头瘤病毒的连接器和检测器下游的所有连接器。不锈钢接头几乎没有问题，但是PEEK接头和管道在高压下会滑动。例如大于约4000磅/平方英寸。你可以用扳手稍微拧紧不锈钢配件来检查它们。聚醚醚酮接头和管道的最佳方法是关闭泵，松开每个接头，将管道牢牢推到喷嘴底部，然后重新拧紧接头。


　　5.检查自动进样器冲洗阶段的溶剂。

　　吹扫自动进样器，这是一个预防性步骤，以确保通向自动进样器的所有冲洗管线都用冲洗溶剂计量，而不是用空气填充。由于管道中的空气，针头或密封件可能没有被正确冲洗。

　　使用新鲜的冲洗溶剂-用新批次的溶剂替换冲洗阶段的溶剂，并用干净的溶剂替换冲洗阶段的容器。更换冲洗溶剂后，在冲洗或冲洗循环中循环自动进样器几次，以确保前一冲洗阶段的所有溶剂痕迹都已清除。


　　调整冲洗阶段的强度。

　　强洗阶段是对导致残留物的样品成分具有亲和力的阶段。对于强有机溶剂的反相色谱，在洗涤混合物中使用更多的有机溶剂，以确保有效洗涤。通常，使冲洗阶段的化学物质与流动相的强度大致相等是有效的。有时值得考虑使用100%强溶剂(通常是乙腈或乙醇)。异丙醇是许多应用的优秀洗涤溶剂，例如脂肪酸，并且已经证明在去除污染物方面比甲醇或乙腈更有效。


　　c  .调节冲洗的酸碱度。


　　考虑到漂洗阶段的pH值是一种化学“强度”。在某些情况下，残留分析物可能对洗涤阶段的酸碱度非常敏感。避免使用酸碱度缓冲液或盐来冲洗混合物，否则蒸发后会留下残留物。切勿使用磷酸盐缓冲液。使用挥发性pH调节剂，如LCMS流动相，如甲酸、乙酸、甲酸铵、乙酸铵或氢氧化铵。通常0.1-1%体积的溶液就足够了。尝试在洗涤溶剂中加入酸或碱，看看残留物是否得到改善。6.启用自动取样器冲洗机制。


　　在注射前后启用针头冲洗。有关冲洗类型和操作原理的具体信息，请参考本文件末尾的部分。多种冲洗选项允许将强/弱冲洗化学品组合用于外部针头表面冲洗和内部注射机构冲洗。

　　解决高效液相色谱残留问题-清洁度。

　　7.更换硬件:更换针头、针头垫片、注射环或人乳头瘤病毒转子。

　　如果您仍在尝试解决剩余问题，则问题很可能与自动进样器硬件有关。此时，您应该更换零件，直到发现问题。通常，最简单的第一步是尝试手动进样阀，或者用不接触目标化合物的自动进样器替换自动进样器。如果这些方法中的任何一种解决了问题，就可以确认问题出在自动进样器上，值得沿着这条路线进行进一步的故障排除。如果您还没有这样做，请更换自动进样器人乳头瘤病毒上的针头垫圈，这在许多情况下是罪魁祸首。如果这不起作用，考虑更换针头和样品环。


　　由于样品和进样溶剂的特性，有时样品会吸附在样品环上。用不同的组合替换循环可以帮助解决这个问题。注射环由不锈钢和聚醚醚酮制成。新的环材料和不同注射溶剂的组合应消除样品在环上的吸附。


　　第三，作为做生意的正常结果，人乳头瘤病毒的内部构件会随着时间的推移而磨损。磨损的转子可能是残留物的来源，但它通常会影响色谱峰的质量。考虑修理或更换人乳头瘤病毒。


　　8.解决具体样品的遗留问题。

　　到目前为止，您已经尝试了所有简单的方法来解决剩余的问题，因此值得花时间检查问题是否针对您的样品。有时，您可以通过检查样品中的另一个峰来进行检查。例如，如果您的方法使用内部标准，请尝试注入大量内部标准，然后注入没有内部标准的空白。也许你可以注射另一种化学相关的化合物，在目前的方法条件下会被洗脱。如果所有其他方法都失败，您可以更换流动相或色谱柱并运行另一种方法。如果您发现残留问题在不同的化合物或方法条件下很常见，则很可能是与自动进样器硬件或系统流程相关的物理问题。