高效液相色谱是一种分析技术，其中样品(通常是有机化合物的混合物)溶解在溶剂中，然后注入色谱柱。样品组分和柱的固定相之间的相对亲和力导致样品组分的分离，然后可以通过各种检测器检测样品组分，并通过将每个峰的强度与参考标准校准曲线进行比较来定量。

　　高效液相色谱变化

　　原则上，它非常简单，并且可以调整广泛的变量来优化色谱分离。广义而言，高效液相色谱分离可分解为：

　　正相：极性固定相；根据极性分开。
　　反相：非极性固定相；基于疏水相互作用的分离。
　　尺寸排阻(GPC):多孔固定相；基于流体力学体积的分离。
　　离子交换：带有离子电荷的固定相；基于离子电荷的分离。


　　并且在每种方法中，许多变量可以被调整以显著影响灵敏度和色谱分辨率，例如流动相(和流动相之间的梯度)、色谱柱的固定相、检测模式/参数和注射条件。通常，最大的挑战是开发合适的样品制备技术，以消除样品基质中的潜在干扰，并将目标化合物溶解在合适的流动相中。


　　高效液相色谱检测器


　　分离的化合物将由各种检测器检测，包括二极管阵列检测器(DAD，本质上是紫外-可见分光光度计，允许测量波长相关的吸光度)、蒸发光散射检测器(ELSD，对几乎所有化合物不太敏感，比流动相更易挥发)、电导检测器(通常用于离子色谱)或荧光检测器。


　　液相色谱-质谱

　　高效液相色谱的一个具体变体是LC-MS，其中质谱仪与高效液相色谱系统耦合，通过色谱分离获得单一化合物的特定质谱，从而在复杂的样品基质中实现分子量分析、结构分析和ppb定量。


　　高效液相色谱和气相色谱-质谱

　　在筛选未知物质时，通常将高效液相色谱与其姊妹方法气相色谱-质谱进行比较。相比之下，高效液相色谱比气相色谱-质谱更适合表征分子量和沸点较高的半挥发性和非挥发性有机化合物。


　　高效液相色谱的应用

　　高效液相色谱的应用范围很广，包括：
　　原料药纯度和稳定性的评价
　　未知的身份或变形
　　降解产物分析
　　聚合物添加剂分析
　　残留分析
　　药物输送特性
　　赋形剂表征
　　低聚物分析
　　批次对比，树脂当量，好坏对比
　　痕量杂质/污染物的表征
　　可提取和可提取的物质
　　清洁验证
　　分子量分析