高效液相色谱是一种令人惊讶的分析化合物的技术,包括生物聚合物、小分子和聚合物。在该方法中,样品首先被溶解以制备溶液。然后将溶液注入含有与样品相互作用的树脂的“柱”中。这将减缓样品通过“柱”的运动,当样品从柱的另一侧出来时,它将被检测到。这使您可以知道样本何时出来以及检测到的样本的强度。
当一些缓冲液连续流过色谱柱时,我们也注入样品,观察样品中不同的分子在不同的“保留时间”出现。色谱柱末端的检测器可以是任何类型的检测器,但最常见的类型是折射率(RI)、紫外(DAD)和荧光(FLD)。每一个都将检测从色谱柱出来的分子的不同特征,并显示色谱图。
色谱类型
不同的色谱柱树脂组成决定了您运行的色谱类型和可以分离的分子。
正相:色谱柱充满极性二氧化硅颗粒,流经系统的缓冲液是非极性的。注射样品后,极性颗粒会比非极性分子更容易粘附在硅胶上,保留时间也更长。
反相:色谱柱内充满疏水颗粒(实际上是表面长有碳氢化合物的硅胶颗粒)。流经系统的缓冲液是极性的(例如,乙腈/水或甲醇/水混合物)。这意味着疏水分子将更多地粘附在树脂上,并停留更长时间。
完整的分步高效液相色谱指南
材料
HPLC 自动进样器样品瓶 | 我只使用自动进样器,因为手动进样很乏味
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