高效液相色谱 (HPLC) 是一项成熟的技术，可根据特定的化学和分子特性将物质混合物分离为其组分。 液体分离基于目标分析物在流动相洗脱液和固定相之间的分布。 固定相包含在高效液相色谱仪的色谱柱中，含有分析物的样品被注入色谱柱，然后泵送通过流动相流。 当它们通过色谱柱时，组分与固定相的相互作用不同，导致它们在不同的时间从色谱柱中分离和洗脱。 这些分离的物质通常用高性能液相色谱检测器检测。  

        一个基本的分析型高效液相色谱系统包括几个组件，包括一个洗脱液容器、一个泵、一个进样阀、一个 HPLC 柱、一个检测器和一个用于色谱数据系统的液体 PC。 小编比较详细地讨论了各个基本液相色谱模块的工作原理。


高效液相色谱泵和洗脱液罐 

有两种主要模式用于将流动相泵送通过 HPLC 系统。 当流动相在运行过程中保持恒定时，例如当洗脱液被回收时，使用等度洗脱。 当分离过程中洗脱液的组成发生变化时，使用梯度洗脱系统。洗脱物质的检测信号称为峰。 通过适当改变流动相组成，应用梯度可以使色谱图中的晚峰比等度模式更快地流出。  在梯度洗脱系统中，可以同时使用高压和低压梯度 (HPG/LPG)。  LPG 使溶剂能够从不同的容器中抽取并在泵的吸入侧混合，而 HPG 使用多个泵提供单独的溶剂流以在排出侧进行混合。  


 高效液相色谱色谱柱 

 HPLC 色谱柱是本仪器的基础。 它包含将样品组分分离为其组成部分所需的固定相介质。 几何形状是 HPLC 色谱柱性能的重要指标。 内径和长度会影响保留率和洗脱时间，固定相的粒径和化学成分也一样。 HPLC 色谱柱支持多种分离机制，包括正相和反相、尺寸排阻、离子交换、亲水相互作用、亲和力等。 稳定的柱温是获得可重现分离结果和一致保留的另一个关键因素。 使用色谱柱恒温器的目的是保持稳定的温度，并确保加热套和淋洗液加热器之间的温度分布均匀。


高效液相色谱仪检测器和软件

用于收集峰的检测器类型由分析物确定。可以使用多种HPLC检测原理，其中一些原理在这里介绍：紫外检测器非常常见，但需要从物质分子吸收光谱的紫外部分发出光。当这种物质不吸收紫外线时，就使用RI探测器。这些检测器用于测量分离分析物随时间变化的信号峰，但它们只能用于等度应用。一组完整的峰称为色谱图。当检测器将RI或UV信号转换为电值时，色谱数据系统会产生这种情况。每个不同的峰提供有关分析物的定性和定量信息，然后数据管理系统可以计算样品的组成。