高效液相色谱 (HPLC) 是一种用于分离和鉴定化合物的实验室技术。它是一种柱色谱法,依靠溶液中不同极性的化合物来分离它们。HPLC 与标准柱色谱不同,因为它使用压力迫使溶液更快地通过色谱柱,因此产生更快、有时更准确的结果。目标是分离色谱柱中的化合物并让它们分别离开。
由于高效液相色谱的速度快且依赖于化合物的不同极性,因此结构和极性相似的两种化合物可以同时或几乎同时离开色谱仪。这称为共流出。共流出使得准确确定混合物的哪一部分在什么点流出变得困难。
高效液相色谱通常使用装有由不同材料制成的珠子的玻璃柱。被迫通过柱子的混合物含有以不同强度与珠子结合的化学物质。结合强度取决于极性的相似性,决定了化学物质在释放前与珠子结合的时间。一些化合物结合如此强烈,以至于它们基本上永远不会从柱中的珠子中释放出来,也永远不会在离开柱的溶液中被测量。
典型的实验室分离技术包括开发一种分析或分离方法,然后实施该分析以从溶液中分离单个化合物。然而,这通常会导致多个解决方案也需要经过程序,从而导致复杂性呈指数级增长。虽然 HPLC 通常可以简化和加速这一过程,但开发 HPLC 设备的成本可能会变得巨大。开发 HPLC 设备虽然沙巴滚球官网入口更高,但比开发用于分离化合物的其他分析方法要昂贵得多。这使得许多小型私营实验室在财务上不可行。
高效液相色谱不仅用于分离简单化合物,还用于从细胞混合物中分离特定蛋白质。在这种情况下,柱中的珠子通常涂有针对您需要收集的蛋白质的特异性抗体。蛋白质与抗体结合,剩余的溶液通过柱子,然后使用另一种溶液释放蛋白质并收集。这需要高度熟练的技术人员随时监控色谱柱并确保该过程完全按计划运行。